Uji Aktivitas Enzim Ligninolitik Fungi Pelapuk Putih
Sampel kultur Fungi Pelapuk Putih
(FPP) dihaluskan menggunakan mortar dalam bak berisi air
dingin dan disaring diambil cairan filtrat dimasukkan ke tabung
eppendorf 1,5 ml. Kemudian disentrifuge pada suhu 4°C selama 10
menit dengan kecepatan 10.000 rpm. Supernatan diambil untuk penentuan
aktivitas enzim.
<h3>Aktivitas Lignin Peroksidase (LiP)</h3>
Aktivitas LiP diukur berdasarkan reaksi dengan veratril alkohol pada
panjang gelombang 310 nm. Komposisi bahan adalah sebagai berikut :
0,45 milimeter aquades; 0,2 milimeter; 0,05 M buffer asetat pH 3;
0,05 milimeter 5mM H2O2; 0,1 milimeter veratril
alkohol 8 mM dan 0,2 milimeter filtrat enzim. Semua bahan dimsukkan
ke dalam kuvet 1 milimeter. Kemudian dikocok perlahan dan
arbsorbansinya dibaca dengan spektrofotometer pada 0 dan 30 menit
(Tien dan Kirk 1992 dalam Indah 2007). Perhitungan aktivitas dengan
menggunakan rumus sebagai berikut :
Aktivitas Enzim (U/ml) = (At –
A0) x Vtot (ml) x 109
ε
maks x d x Vol enzim (ml) x t
ε
maks = absorpsivitas molar Veratril alkohol (9300 M-1
cm-1)
d = tebal kuvet (cm)
Satu unit aktivitas LiP didefinisikan sebagai banyaknya enzim yang
mngoksidasi 1nmol substrat per menit.
<h3> Aktivitas Manganese Peroksidase (MnP)</h3>
Aktivitas MnP diukur berdasarkan reaksi dengan guaiakol pada panjang
gelombang 465 nm. Komposisi bahan adalah sebagai berikut : 0,3
milimeter akuades; 0,1 milimeter buffer Na-laktat 50 mM pH 4,5; 0,1
milimeter H2O2 1 mM; 0,2 milimeter MnSO4
1 mM dan 0,1 milimeter guaiakol 4 mM. Semua bahan dimasukkan
ke dalam kuvet 1 milimeter, kemudian dikocok perlahan dan
absorbansinya dibaca dengan spektrofotometer pada 0 dan 30 menit.
Aktivitas MnP didapat dengan mengulang reaksi tanpa MnSO4
dengan penambahan akuades menjadi 0,5 milimeter (Kofujita et al.
1992 dalam Fitria 2005 dalam Indah 2007).
Perhitungan aktivitas dengan menggunakan rumus sebagai berikut :
Aktivitas Enzim (U/ml) = (At – A0)
x Vtot (ml) x 109
ε
maks x d x Vol enzim (ml) x t
ε
maks = absorpsivitas molar Guaiakol (12100 M-1
cm-1)
d = tebal kuvet (cm)
Aktivitas Enzim MnP setiap unit = A(U) – B(U)
Satu unit MnP sebanding dengan 1nmol produk yang dihasilkan per
menit
Berbagi Tak Pernah Rugi 
ngak jelas rumusnya, jadi ngak tau…
Yup…ada kesalahan penampilan rumusnya, nanti diperbaiki lagi.
pak ISro’i..saya mahasiswa bimbingan bu Ria Millati FTP UGM..InsyaAllah akan meneliti ektivitas enzim lignosellulose terhadap delignifikasi TKKS…mohon bantuaannya secara on line juga ga apa-apa…hehe ini rumusnya belum diperbaiki ya?trus metode apa yang sering dipakai dalam penentuan aktivitas enzim. terimakasih
Minggu depan ingatkan saya untuk mengirimkan metodenya. Minggu ini dan minggu depan saya banyak kerjaan.
bagaimana metode pengukuran aktifitas enzimnya, pak Isroi? kami sedang mencari refrensinya tapi cuma dapet aktifitas enzim sellulase secara umum saja.
metodenya sama seperti di atas, cuma ada sedikit modifikasi untuk beberapa metode. saya sedang di boras. nanti saya carikan literaturnya.
Pak rumus penentuan aktivitas enzim kok belom ada keterangannya, apa itu A, t, 0 etc…mohon konfirmasi.
Saya agak kesulitan menampilkan rumus di halaman ini. Ao = absorbance awal, At = absorbance setelaah waktu t, t = waktu dalam menit.
Coba cek di link ini, sudah saya perbaiki rumusnya.
https://isroi.wordpress.com/2010/11/04/analisa-aktivitas-enzime-ligninolitik-revised/