Uji aktivitas beta glukosidase

Enzyme beta glucosidase adalah salah satu enzyme penting untuk menghidrolisis selulosa dalam pembuatan etanol dari biomassa lignoselulosa. Ada beberapa metode pengujian aktivitas enzyme beta glukosidase salah satunya menggunakan substrat p-nitrophenyl-B-D- glucopyranoside yang sering disingkat PNP-glu. Referensi dasarnya adalah Herr et al., 1978. Berikut ini penjelasan singkat uji aktivitas beta glukosidase dengan menggunakan PNP-glu sebagai substrate.

Substrat: 2mM PNP-glu dalam 5mM buffer sitrat pH 4.8
Catatan: buffer yang digunakan disesuaikan dengan pH dan buffer yang optimum untuk aktivitas enzyme yang akan diuji. Beberapa literatur menggunakan buffer pada pH 5, pH 4.5 dan lainnya.

Enzyme beta glucosidase: enzyme diencerkan dengan menggunakan buffer sitrat pH 4.8 5mM.
Aktivitas enzyme pada pengenceran ini kurang lebih 2-5 unit/ml. Kalau aktivitasnya belum diketahui perlu dicoba-coba dulu sampai ketemu pengenceran yang memberikan absorbansi di bawah 1.

Suhu: suhu pengujian disesuaikan dengan suhu optimum untuk aktivitas enzyme yang akan diuji, biasanya adalah 50 oC.

Tabel Pengujian

Blanko substrat Enzyme test
Substrat (mL) 1 1
Sampel enzyme (mL) 0.1
Buffer (mL) 0.1
Na2CO3 1 M (mL) 2 2

Prosedur:
1. Tambahkan 1 ml substrat PNP-glu ke dalam tabung reaksi.
2. Rendam tabung ke dalam water bath suhu 50 oC selama kurang lebih 5 menit hingga suhu substrat mencapai 50oC.
3. Tambahkan sampel enzyme ke dalam tabung.
4. Diinkubasi selama 10 menit.
5. Setelah 10 menit tambahkan larutan Na2CO3 2mL.
6. Pengukuran absorbansi dilakukan pada panjang gelombang 403nm. Untuk blanko spektro menggunakan larutan buffer.

1 unit aktivitas enzyme dinyatakan sebagai jumlah enzyme yang menghasilkan 1 umol p-nitrophenol per menit.

Rumus perhitungan berdasarkan pada hukum Lambert Beer. Untuk contoh resep uji di atas adalah sebagai berikut:

Unit/ml = (Absorbansi sampel enzyme – absorbandi blanko substrate)(3.1)(df)/(18.5)(10)(0.1)

df=dillution factor atau faktor pengenceran
3.1 = total volume reaksi
18.5 = absortiviti p-nitrophenol pada panjang gelombang 405 nm
10 = waktu
0.1 = volume sampel enzyme yang ditambahkan

Herr D, Baumer F, and Dellweg H. Purification and properties of an extracellular β-glucosidase from Lenzites trabea. Applied Microbiology and Biotechnology 1978; 5(1): 29-36.

Advertisements

One response to “Uji aktivitas beta glukosidase

  1. kalau mau download jurnalnya di mana ya? apa bisa dikirim ke e-mail saya? terima kasi 🙂

Leave a Reply

Fill in your details below or click an icon to log in:

WordPress.com Logo

You are commenting using your WordPress.com account. Log Out / Change )

Twitter picture

You are commenting using your Twitter account. Log Out / Change )

Facebook photo

You are commenting using your Facebook account. Log Out / Change )

Google+ photo

You are commenting using your Google+ account. Log Out / Change )

Connecting to %s